桿狀病毒表達(dá)載體系統(tǒng)(baculovirus expression vector system,BEVS)是當(dāng)今基因工程四大表達(dá)系統(tǒng)之一。BEVS屬于真核表達(dá)系統(tǒng),通過BEVS得到的重組病毒易于篩選、具有翻譯后修飾功能、表達(dá)外源基因的效率較高。BEVS還可以同時(shí)表達(dá)多個(gè)外源基因,在分泌蛋白生物活性的同時(shí)增加產(chǎn)量。因此,BEVS在科研和工業(yè)生產(chǎn)中通常應(yīng)用于大規(guī)模重組蛋白的制備
實(shí)驗(yàn)步驟 | 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 |
密碼子優(yōu)化及基因合成 | 分析基因序列,優(yōu)化密碼子,合成目的基因,提供載體 |
重組質(zhì)粒構(gòu)建 | 構(gòu)建含有目的基因的載體質(zhì)粒 |
重組桿狀病毒載體構(gòu)建 | 將目的基因亞克隆到合適的桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體上 |
重組桿狀病毒擴(kuò)大培養(yǎng) | 轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞,制備病毒貯液,空斑實(shí)驗(yàn)測(cè)定病毒滴度 |
表達(dá)條件優(yōu)化 | 檢測(cè)并優(yōu)化表達(dá)條件(細(xì)胞株、MOI、時(shí)間溫度等) |
大規(guī)模桿狀病毒昆蟲細(xì)胞培養(yǎng) | 根據(jù)優(yōu)化條件,可提供大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng) |
蛋白分析和純化 | 通過SDS-PAGE電泳檢測(cè)每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。 |
全國(guó)統(tǒng)一服務(wù)熱線:025-58861700
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